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E玫瑰花環(huán)形成試驗

發(fā)布時間： 2022-12-02　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1801次

原理
正常人外周血中 T 細(xì)胞在體外能直接和綿羊紅細(xì)胞（SRBC）結(jié)合形成玫瑰花樣細(xì)胞團(tuán)。這是因為人的T 細(xì)胞膜上具有能和SRBC 膜上的糖蛋白相結(jié)合的受體，稱為E 受體。已證實E 受體是人T 細(xì)胞所*的表面標(biāo)志，因此本試驗可作為人外周血T 細(xì)胞的鑒定和計數(shù)，同時作為人細(xì)胞免疫功能狀態(tài)的一個檢測指標(biāo)，也是分離T 細(xì)胞的常用方法之一。本實驗為示教內(nèi)容，學(xué)生只看結(jié)果。
材料與儀器
肝素抗凝人外周血
淋巴細(xì)胞分層液 SRBC懸液 Hank's液 NBS
血球計數(shù)板尖吸管載玻片瑞氏染液
步驟
1. 取肝素抗凝血1 ml 加1 ml Hank's 液，混勻后用尖吸管將其加在2 ml分層液上。

2. 離心2000 rpm，30 分鐘，用尖吸管吸取血漿與分層液界面處富含淋巴細(xì)胞的懸液置于另一潔凈試管中。

3. 用Hank's 液以1000 rpm，離心10 分沖洗細(xì)胞兩次，末次棄上清后再加入Hank's液1 ml，混勻，用微量加樣器吸取0.02 ml 加于0.38 ml 白細(xì)胞計數(shù)液中，在血球計數(shù)板上于低倍鏡下計數(shù)，并根據(jù)下式算出每毫升細(xì)胞數(shù)。然后用Hank's液配制成107 /ml細(xì)胞懸液。

4. 取107 /ml細(xì)胞懸液0.1 ml加0.1 ml經(jīng)SRBC吸收的滅活NBS，再加0.2 ml0.5 %SRBC懸液，混勻，放37 ℃溫箱5 分鐘，低速離心500 rpm，5 分鐘，然后放4 ℃冰箱2 小時或過夜。

5. 取出試管，輕輕使沉淀的細(xì)胞懸浮，用尖吸管取出一滴置于載玻片上，蓋上已滴加瑞氏染液的蓋玻片，于高倍鏡下觀察計數(shù)。

注意事項
1. SRBC 自綿羊體內(nèi)取出后限在2 周內(nèi)使用。

常見問題
一、實驗結(jié)果

計數(shù) 200 個淋巴細(xì)胞，凡結(jié)合3 個SRBC 以上者為E 玫瑰花陽性細(xì)胞，求出百分率即為T 細(xì)胞百分比。正常值為68±9.9%。

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