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哺乳動(dòng)物中制備基因組 DNA 實(shí)驗(yàn)

發(fā)布時(shí)間： 2021-12-14　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1486次

材料與儀器
動(dòng)物組織
PBS 乙酸銨乙醇酚氯仿異戊醇 TE
離心機(jī) 搖床研缽
步驟

1. 切下組織并立即剪成小塊，置于液氮中凍結(jié)。

2. 將200 mg~1 g 的組織用預(yù)冷的研缽和研杵研碎，或用錘子將其搗為細(xì)粉末，每100 mg 組織用1. 2 ml 消化緩沖液懸浮。

3. 500 g 離心細(xì)胞5 min，棄上請(qǐng)。貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞先用胰酶消化。

4. 細(xì)胞用1~10 ml 冰冷的PBS重懸，500 g 離心5 min，棄上清，重復(fù)1次。

5. 用1體積的消化緩沖液重懸細(xì)胞。

6. 將樣品在蓋緊的管中于50℃搖蕩下溫育12~18 h。

7. 用等體積的酚/氯仿/異戊酵抽提樣品，1 700 g 離心10 min。

8. 如果樣品溶解得不好，再加1體積不含蛋白酹K的消化緩沖液，并重復(fù)離心。

9 如果在界面上有一層厚的白色物質(zhì)，重復(fù)有機(jī)抽提，將上層（水溶液）轉(zhuǎn)移至一個(gè)新管中。

10. 加入1/2體積7.5 ml 乙酸銨和2體積100%乙醉，1 700 g 離心2 min。

11. 用70%乙酵洗滌，晾干，沉淀用TE。

12. 緩沖液重新溶解，使終濃度在約1 mg/ml 左右。

注意事項(xiàng)
1. 如果是用肝組織，要除去膽囊，因其含有高水平的各種消化酶。
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