-
實(shí)時(shí)熒光定量PCR的優(yōu)化（一）
發(fā)布時(shí)間： 2021-10-12 點(diǎn)擊次數(shù)： 2739次如果是病毒定量和SNP基因分型的實(shí)時(shí)熒光定量PCR，我們需要盡可能高特異性；如果是病原體、mRNA檢測(cè)，我們需要高靈敏度。 想要提高PCR擴(kuò)增效率、特異性及靈敏度，我們可以通過(guò)一系列措施優(yōu)化實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)。首先是靶序列的選擇。 1、選擇的靶序列合適長(zhǎng)度在50～150bp之間。較短的序列合成耗時(shí)短，擴(kuò)增時(shí)間縮短，因此污染DNA被擴(kuò)增的可能性降低。 2、選擇靶序列時(shí)，使用BLAST檢索分析靶序列是否存在多態(tài)性和測(cè)序錯(cuò)誤，并避開(kāi)。如果靶序列中出現(xiàn)重復(fù)序列，會(huì)降低PCR檢測(cè)靈敏度，也應(yīng)該避開(kāi)。 3、控制靶序列中GC含量≤60%。高GC含量，會(huì)影響靶序列在熱循環(huán)中的變性，也容易產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。 4、避免產(chǎn)生二級(jí)結(jié)構(gòu)。靶序列如果有反向重復(fù)的序列，容易產(chǎn)生二級(jí)結(jié)構(gòu)，影響引物、探針的雜交。 除此以外，我們還需要保證模板的質(zhì)量不會(huì)影響擴(kuò)增，實(shí)時(shí)熒光PCR的結(jié)果才有可靠性。例如損傷的DNA在PCR中不能充分?jǐn)U增，或者根本不能擴(kuò)增。同時(shí)，如果模板中存在抑制DNA聚合酶的試劑（DMSO等）和污染物（SDS等），也會(huì)影響PCR的可靠性。
產(chǎn)品中心
Products
-
血清系列
-
細(xì)胞轉(zhuǎn)染
-
支原體清除
-
細(xì)胞凍存
-
實(shí)驗(yàn)耗材
-
分子試劑
-
細(xì)胞增殖與凋亡
-
Biozellen系列
-
培養(yǎng)基
-
ELISA試劑盒
-
TOYOBO（東洋紡）
-
ZYMO RESEARCH
-
Greiner（格瑞納）
-
IKA（艾卡）
-
化學(xué)發(fā)光底物（ECL）
-
PROSPEC系列
-
Epigentek系列
-
微生物檢測(cè)
-
細(xì)胞生物學(xué)
-
Corning康寧
-
解離試劑
-
細(xì)胞類-實(shí)驗(yàn)耗材
-
原代細(xì)胞
-
植物檢測(cè)系列試劑盒
-
SERANA
-
細(xì)胞系
-
生化試劑盒
-
環(huán)境檢測(cè)系列試劑盒（AKEN）
-
類器官培養(yǎng)
-
緩沖器和解決方案
-
生物三凝膠基質(zhì)
-
細(xì)胞因子分子
-
生物樣本庫(kù)
-
蛋白研究系列
-
修飾檢測(cè)試劑盒
