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免疫細(xì)胞傳代后多久適合進(jìn)行轉(zhuǎn)染？

發(fā)布時(shí)間： 2023-02-06　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1538次

　　理想免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法應(yīng)具有效率高、細(xì)胞毒性小、重復(fù)性好、安全、簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)是目前轉(zhuǎn)染效率高的方法，同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢(shì)。但病毒轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對(duì)細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性，在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法，則各有其特點(diǎn)。
　　常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞傳代方法有貼壁細(xì)胞用消化法傳代和懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞采用離心分離后傳代。貼壁細(xì)胞消化時(shí)，因細(xì)胞對(duì)胰酶的敏感程度不同，所以消化時(shí)間差別較大。對(duì)于初學(xué)者，消化程度也很難掌握好，加入適量胰酶，輕輕搖晃3-4次（使細(xì)胞充分與胰酶接觸），隨即吸取胰酶，放于培養(yǎng)箱消化，數(shù)分鐘后取出，輕拍培養(yǎng)瓶，見(jiàn)細(xì)胞自瓶壁滑下即可，若沒(méi)有則繼續(xù)消化。
　　細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的細(xì)胞，接種于培養(yǎng)板，加培養(yǎng)液，培養(yǎng)過(guò)夜（細(xì)胞長(zhǎng)至85-90%滿）；按說(shuō)明書進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)注意預(yù)備脂質(zhì)體/DNA混合物必須在無(wú)血清下進(jìn)行。在轉(zhuǎn)染之前更換培養(yǎng)基，可提高轉(zhuǎn)染效率，但所用培養(yǎng)基必須37℃預(yù)溫。脂質(zhì)體/DNA混合物應(yīng)當(dāng)逐滴加入，盡可能保持一致，從培養(yǎng)皿一邊到另一邊，邊加入邊輕搖培養(yǎng)皿，以確保均勻分布和避免局部高濃度。
　　對(duì)于細(xì)胞轉(zhuǎn)染，一般在細(xì)胞中期轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染效率會(huì)相對(duì)高一些。這個(gè)時(shí)候的細(xì)胞狀態(tài)是的。對(duì)于轉(zhuǎn)染的佳時(shí)間是在傳代后24hr以內(nèi)。轉(zhuǎn)染后48hr，外源基因肯定是有表達(dá)的。至于72hr，應(yīng)該也還是有表達(dá)的，可能表達(dá)量會(huì)很低，主要是這個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞大部分都衰老了。建議293T收集細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染后36-48hr收集。

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