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細胞復蘇

發(fā)布時間： 2023-01-11　　點擊次數(shù)： 1568次

簡介
細胞復蘇是將凍存在液氮中的細胞解凍之后重新培養(yǎng)，細胞恢復生長的過程。
材料與儀器
器材：37℃ 水浴箱、離心機、無菌試管以及培養(yǎng)瓶。

試劑：

① 含 20％血清 RPMI 1640 培養(yǎng)液；

步驟
細胞復蘇的基本過程可分為如下幾步：

A 從液氮中取出細胞安瓿或凍存管，置 37℃ 水浴中迅速融化，一旦冰塊消失即將凍存管從水浴中取出。

B 用 70％乙醇擦洗凍存管外部以減少污染機會。

C 吸取凍存管內(nèi)容物緩慢加入含 4-5 ml 培養(yǎng)液的 T-25 細胞培養(yǎng)瓶中，置 5％CO2、37℃ 細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)，次日換液。也可通過離心去除細胞保護劑，再進行細胞培養(yǎng)。

注意事項
凍存細胞并非能達到 100％復蘇成功。復蘇失敗可能與以下因素有關，凍存時細胞數(shù)量少或生長狀態(tài)不良；細胞受細菌或支原體污染；液氮罐保管不善；復蘇時培養(yǎng)條件改變，如將胎牛血清換成小牛血清；復蘇方法不得當?shù)取?/p>

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