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    細胞活性測定方法大全

    發(fā)布時間: 2023-01-10  點擊次數(shù): 2954次

    代謝增殖測定



    MTT檢測法

    活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶,能使額外添加的MTT還原為不溶于水的藍紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan),并沉積在細胞中,死細胞則無此現(xiàn)象。接著用二甲基亞砜(DMSO)溶解沉積在細胞中的甲瓚后,可利用酶標(biāo)儀490nm波長測光吸收值,依據(jù)吸光值(OD值)計算出活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi),吸光值與細胞活性成正比。

    △ 圖例



    XTT檢測法

    與MTT原理相似,皆是利用添加物與活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶反應(yīng),并利用酶標(biāo)儀測定產(chǎn)物光吸收值;不同于MTT法的是,XTT法還原產(chǎn)物是水溶性的橙黃色甲肷,不需經(jīng)過二甲基亞砜(DMSO)溶解步驟,即可直接測定光吸收值,操作較MTT方便快速。當(dāng)XTT與電子耦合劑作用后產(chǎn)生的水溶性甲肷吸光值與活細胞數(shù)成正比。

    △ 圖例



    DNA合成增殖實驗


    BrdU檢測法

    BrdU為胸腺嘧啶核苷(Thymine)的衍生物,可用于標(biāo)記活細胞中新合成的DNA(細胞活性周期S期),BrdU可隨著DNA復(fù)制進入子細胞,因此在加入BrdU后分裂增殖的細胞DNA都會帶有BrdU標(biāo)記,可通過抗BrdU單克隆抗體檢測,借此檢測細胞的增殖能力,但BrdU單克隆抗體檢測過程需要將部分DNA變性,使部分雙股解開成單股才能順利檢測。且BrdU為光敏性,因此需要在光線刺激較低(黑暗)的環(huán)境下操作,并避光培養(yǎng)。

    △ 圖例



    EdU檢測法

    EdU原理跟BrdU檢測法很像,都是代替胸腺嘧啶(Thymine,T)滲入正在復(fù)制的DNA中,并加入能與EdU反應(yīng)的熒光染料,即可利用檢測熒光值偵測細胞增殖,或在細胞組織級別作為標(biāo)記追蹤等研究,實驗過程不需要經(jīng)過BrdU檢測法的DNA變性處理。

    △ 圖例


    化學(xué)發(fā)光細胞活性測定


    ATP發(fā)光法

    ATP是細胞的能量直接來源,ATP發(fā)光法是通過檢測細胞內(nèi)ATP含量來分析細胞增殖。市面上的原理是利用外源的螢火蟲熒光素(Luciferin)與熒光素酶(Luciferase),以細胞內(nèi)含的ATP為能量來源,發(fā)生氧化反應(yīng)產(chǎn)生生物冷光,因此可通過監(jiān)測冷光光度,來對應(yīng)ATP含量并判斷細胞增殖狀況。

    △ 圖例



    熒光染料增殖實驗


    CFSE檢測法

    CFSE是一種可穿透細胞膜的熒光染料,具有細胞膜通透性,能夠自由進入細胞;當(dāng)CFSE擴散穿過細胞膜,會與細胞內(nèi)源酯酶產(chǎn)生水解反應(yīng)而被激發(fā),發(fā)出綠色熒光,這些帶熒光的CFSE會進一步與細胞骨架蛋白結(jié)合,形成穩(wěn)定的胞內(nèi)熒光蛋白。每當(dāng)細胞進行分裂增殖,胞內(nèi)熒光蛋白會被平均分配到下一代細胞中,因此細胞熒光強度會隨著增殖代數(shù)增加而不斷地降低,可用流式細胞儀進一步檢測分析得出細胞分裂增殖的情況。CFSE的濃度,對于最終判斷細胞增殖結(jié)果有直接性的影響。

    △ 圖例



    臺盼藍細胞計數(shù)


    臺盼藍(Trypan Blue)計數(shù)法

    臺盼藍是一種藍色細胞活性染料,無法通過結(jié)構(gòu)完整的細胞膜進入細胞內(nèi)部;但細胞死后,喪失細胞膜穩(wěn)定性,臺盼藍會進入細胞將細胞染成藍色,因此在細胞實驗中,常規(guī)地搭配自動細胞計數(shù)儀或血球計數(shù)板,應(yīng)用于分辨活細胞和死細胞、及檢測細胞膜的完整性。

    △ 圖例



    Orangu™細胞計數(shù)


    Orangu™計數(shù)法

    Orangu™ solution是一種無細胞毒性、高靈敏度、比色法,用于測定細胞增殖和細胞毒性的細胞活性試劑。利用WST-8(細胞代謝的一種水溶性的四唑鹽)在細胞內(nèi)線粒體脫氫酶作為電子介質(zhì)的情況下,它被還原為橙色的甲瓚染料,且產(chǎn)生甲瓚染料的數(shù)量與活細胞的數(shù)量和培養(yǎng)時間成正比。操作簡單快速,結(jié)果可重復(fù)。

    △ 圖例



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