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消除微生物污染

發(fā)布時(shí)間： 2023-01-06　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1946次

原理
通過沖洗單層培養(yǎng)物或通過離心重懸非貼壁細(xì)胞，以高濃度抗生素清洗培養(yǎng)物數(shù)次，然后將培養(yǎng)物傳代，用加抗生素的培養(yǎng)基傳三次，再用不加抗生素的培養(yǎng)基傳三次，每次傳代后都要檢測(cè)是否污染。
材料與儀器
DBSS
高濃度抗生素培養(yǎng)液
用于傳代培養(yǎng)的材料帶有40×或60×物鏡的相差顯微鏡用于支原體染色的材料
步驟
1. 仔細(xì)收集污染培養(yǎng)液，如有可能，應(yīng)測(cè)試該有機(jī)體對(duì)一系列抗生素的敏感性，如果做不到，則應(yīng)對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行高壓滅菌或加入次氯酸鹽。

2. 用 DBSS 沖洗細(xì)胞（每一次沖洗可使污染物濃度減少兩個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)，除非污染物黏貼在細(xì)胞上）。

(a)對(duì)于單層培養(yǎng)物，用 DBSS 沖洗培養(yǎng)物三次，然后用胰蛋白酶處理，再用 DBSS 通過離心與再懸浮清洗細(xì)胞兩次以上。

(b)對(duì)于懸浮培養(yǎng)物，通過離心和重懸，用 DBSS 沖洗培養(yǎng)物 5 次。

3. 將細(xì)胞以盡可能低而又合適的細(xì)胞濃度接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。

4. 加入含高濃度抗生素的培養(yǎng)基，每?jī)商鞊Q一次。

5. 用高濃度抗生素培養(yǎng)基進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

6. 重復(fù)進(jìn)行 1~4 的步驟，傳代培養(yǎng)三次。

7. 移去抗生素，在無(wú)抗生素情況下，將這些細(xì)胞再進(jìn)行三次傳代培養(yǎng)。

8. 用相差顯微鏡及 Hoechst 染色檢査培養(yǎng)物。

9. 對(duì)這些細(xì)胞再進(jìn)行兩個(gè)月的培養(yǎng)，不加抗生素，檢査以確定所有污染已被消除。
常見問題
一般的原則是應(yīng)將污染的培養(yǎng)物丟棄，而不要試圖去除污染，除非是至關(guān)重要必須保留的細(xì)胞系才考慮去除污染。在任何情況下，很難做到完-全消除污染。特別是在酵母污染時(shí)，如果試圖去除污染，可能導(dǎo)致產(chǎn)生更頑固的對(duì)抗抗生素的細(xì)胞。

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