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平滑肌細(xì)胞的分離和培養(yǎng)

發(fā)布時間： 2022-12-09　　點(diǎn)擊次數(shù)： 2158次

料與儀器
0.25%胰蛋白酶和EDTA混合液
平滑肌培養(yǎng)液
Petri培養(yǎng)皿手術(shù)刀和10號手術(shù)刀片解剖剪組織鑷
步驟
1. 從小牛取胸主動脈。

2. 將胸主動脈浸入 Hanks 液。

3. 分離細(xì)胞之前將動脈放在冰上。

4. 將動脈放入 150 mm × 25 mm Petri 培養(yǎng)皿。

5. 用解剖剪沿長軸剪開動脈。

6. 用手術(shù)刀片輕刮動脈內(nèi)腔面，以除去內(nèi)皮細(xì)胞。

7. 將動脈的中膜與內(nèi)膜和外膜分離。

8. 將中膜切成約 1 cm2 大小的組織塊。

9. 將中膜組織塊放入 60 mm × 15 mm Petri 培養(yǎng)皿，內(nèi)膜側(cè)朝下。

10. 讓組織塊貼壁約 10 min。

11. 直接在組織塊上注 1 ml SMCM（平滑肌培養(yǎng)液（smooth muscle cell medium，SMCM）：DMEM 添加 20 % FBS，100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 鏈霉素）。

12. 將組織塊放入濕潤的培養(yǎng)箱，在 37°C 和 10% CO2 條件下孵育。

13. 第 2 天加入 5 ml SMCM，注意勿讓組織塊去附著。

14. 將組織塊繼續(xù)孵育 10 d。此后，平滑肌細(xì)胞從組織塊遷移出來，并變?yōu)閱螌印?br style="border: 0px solid currentcolor; box-sizing: border-box; --tw-shadow:0 0 #0000; max-width: 100%; background: none !important; font-size: 0.32rem !important; line-height: 0.48rem !important; margin: 0px !important;"/>
15. 細(xì)胞生長接近形成單層時，用 0.25 % 胰蛋白酶和 EDTA 混合液傳代。

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