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轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)選擇什么PCR酶？

發(fā)布時(shí)間： 2022-06-08　　點(diǎn)擊次數(shù)： 2179次

轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)選擇什么PCR酶
Taq酶
高保真酶

這取決于你的克隆方案，是用平末端還是粘性末端。

如果后續(xù)克隆用平末端連接，可以使用高保真酶，產(chǎn)生的末端就是就平末端，進(jìn)行平末端連接。

如果后續(xù)克隆用粘性末端，使用普通的Taq酶就可以了。Taq會(huì)在產(chǎn)物末端多帶一個(gè)A尾巴，對(duì)應(yīng)的載體是帶T尾巴的T載體。

如果在引物設(shè)計(jì)上，在PCR產(chǎn)物末端引入一些酶切位點(diǎn)序列，那么尾巴就會(huì)更長(zhǎng)。加入尾巴時(shí)應(yīng)考慮目的基因插入載體的方向，設(shè)計(jì)酶切位點(diǎn)序列尾巴。如果尾巴設(shè)計(jì)反了，插入的目的基因也是反方向的，就無(wú)法起效。

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