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標(biāo)簽酶消化釋放標(biāo)簽實(shí)驗(yàn)

發(fā)布時(shí)間： 2022-03-24　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1682次

材料與儀器
溶液與緩沖液 LoTE
Eppendorf 試管
步驟

實(shí)驗(yàn)方案 A
1.向含有 Dynabeads 的每個(gè)試管中加入下列物質(zhì)：
2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。
3.時(shí)收集上清液（含有釋放的 cDNA 標(biāo)簽）
4.用 LoTE 擴(kuò)容到 200mL。
5.等體積的 PCI 抽提，乙醇沉淀（實(shí)驗(yàn)方案 A，第 2 步）。
6.將沖洗和風(fēng)干后的沉淀重新懸浮于 10 ul LoTE 中。
實(shí)驗(yàn)方案 B
1.從 PCR 試管中移去連接反應(yīng)混合物并用 50ul 洗液洗滌 1 次。
2.從試管中移去沖洗液，加入 50 ul 的 1X 限制性緩沖液，然后移去限制性緩沖液。
3.向試管中加入下列物質(zhì)：
4.在 65°C 下消化 lh。
5.加入 175ul 的 LoTE 然后轉(zhuǎn)移到 1.5 ml 的 Eppendorf 試管中。不要丟棄，因?yàn)榛旌衔镏泻兴尫诺母街诮宇^上的 SAGE 標(biāo)簽。
6.如上所述，用等體積的 PCI 抽提，乙醇沉淀（實(shí)驗(yàn)方案 A，第 2 步)。
7.將沖洗和風(fēng)干后的沉淀重新懸浮于 21.5ul 的 LoTE 中。
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