在細(xì)胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，這些問題從細(xì)胞生長角度來說，針對細(xì)胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法。

一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁

可能原因： 

●胰蛋白酶消化過度 ；

●支原體污染 ；

●培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；              

●細(xì)胞老化 ；

●接種細(xì)胞起始濃度太低或太高 。

解決方法： 

●縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度； 

●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；

●使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2 ；

●啟用新的保種細(xì)胞 ；

●調(diào)節(jié)最佳接種細(xì)胞濃度。

二、懸浮細(xì)胞成簇

可能原因： 

●培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子 ；

●支原體污染；

●蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解；

●DNA污染 。

解決方法： 

●用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液；

●分離培養(yǎng)物，檢測支原體；

●用DNaseI處理細(xì)胞。

三、培養(yǎng)細(xì)胞生長緩慢

可能原因：

●由于更換不同培養(yǎng)液或血清； 

●培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞； 

●培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染； 

●試劑保存不當(dāng)； 

●接種細(xì)胞起始濃度太低； 

●細(xì)胞已老化； 

●支原體污染 。

解決方法： 

●比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實(shí)驗，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液； 

●換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長因子；

●用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物；

●血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完；

●增加接種細(xì)胞起始濃度； 

●換用新的保種細(xì)胞； 

●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

四、培養(yǎng)細(xì)胞生長不好

可能原因：

●細(xì)胞本身的狀態(tài)

細(xì)胞傳代次數(shù)多，細(xì)胞老化；

細(xì)胞的接種量：接種量過低，細(xì)胞生長緩慢；

細(xì)胞傳代時間過晚：細(xì)胞中毒，影響傳代后的細(xì)胞生長；

胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細(xì)胞死亡；時間過短，細(xì)胞未*分離而成團(tuán)，細(xì)胞死亡；

細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速融。

●污染

支原體污染；

霉菌污染。

●培養(yǎng)基或血清

更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗證；

選擇的培養(yǎng)基是否合適；

培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無誤。

●培養(yǎng)環(huán)境

CO2供應(yīng)是否正常；

培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確。

解決方法：

根據(jù)以上四個方面的可能原因，做出針對性的解決方案

●注意細(xì)胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)、接種量等；

●避免產(chǎn)生污染（用正規(guī)、合法、可溯源的血清）；

●要用合適的血清或培養(yǎng)基，最好經(jīng)過驗證；

●注意實(shí)驗室的環(huán)境。

五、培養(yǎng)細(xì)胞死亡

可能原因： 

●培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2； 

●培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大； 

●細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷； 

●培養(yǎng)液滲透壓不正確； 

●培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積 。

解決方法： 

●檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2； 

●檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度； 

●取新的保存細(xì)胞種； 

●檢測培養(yǎng)液滲透壓； 

●換入新鮮培養(yǎng)液。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎關(guān)注安培生物科技有限公司了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。