-
大鼠肝星狀細胞培養(yǎng)技術
發(fā)布時間： 2021-12-06 點擊次數(shù)： 1568次材料與儀器
雄性 SD 大鼠
戊巴（匕匕）妥鈉 小牛血清 DMEM 酶消化液I、Ⅱ Nycodenz D-Hanks’液 HBSS 臺盼蘭
手術器械 尼龍網 相差顯微鏡 熒光顯微鏡步驟
一、實驗步驟
1. 大鼠腹腔麻醉后在超凈臺上剖腹，進行門靜脈插管。2. 以D-Hanks‘液灌注，同時剪開下腔靜脈，沖掉血液后，改灌以100 ml 酶消化液I(0.05% IV 型膠原酶)。3. 待肝臟變軟后，離體肝臟并剪碎，繼續(xù)以酶消化液II(含20U/ml DNase I 的0.05% IV 型膠原酶)消化15 min，尼龍網過濾后以450 g 離心5 min(4℃，下同)。4. 以HBSS 重懸沉淀至10 ml，再混以20 ml Nycodenz 液，分置于離心管中，并分別覆以2-3 ml HBSS，1450 g 離心16 min 后取界面細胞。5. 以HBSS重懸后再次離心收集細胞，以DMEM重懸后進行細胞計數(shù)，并判斷存活率和產量，最后按照常規(guī)方法接種(105 細胞/cm2 )，次日換液，以后每2-3 天換液一次。6. 傳代方法：棄去培液后以D-Hanks’液洗兩次，加0.125%胰酶(原代最好加0.05% EDTA)消化，鏡下觀察細胞突起回縮(2-5 min左右)，以*培液(DMEM+10% NBS)終止反應(若不用EDTA，可以不需離心)， 充分吹打后以 1:2-1:3 接種，然后繼續(xù)培養(yǎng)(5% CO2，37℃)。
二、結果接種次日，光鏡下可見細胞呈星芒狀，胞質內有脂滴，熒光鏡下328 nm 處見自發(fā)熒光。附照片(圖 1)。
圖 1. 原代培養(yǎng)第 2 天的大鼠肝星狀細胞
- 下一篇：淺談溶解度
- 上一篇：大鼠胰島細胞培養(yǎng)實驗
產品中心
Products
-
血清系列
-
細胞轉染
-
支原體清除
-
細胞凍存
-
實驗耗材
-
分子試劑
-
細胞增殖與凋亡
-
Biozellen系列
-
培養(yǎng)基
-
ELISA試劑盒
-
TOYOBO（東洋紡）
-
ZYMO RESEARCH
-
Greiner（格瑞納）
-
IKA（艾卡）
-
化學發(fā)光底物（ECL）
-
PROSPEC系列
-
Epigentek系列
-
微生物檢測
-
細胞生物學
-
Corning康寧
-
解離試劑
-
細胞類-實驗耗材
-
原代細胞
-
植物檢測系列試劑盒
-
SERANA
-
細胞系
-
生化試劑盒
-
環(huán)境檢測系列試劑盒（AKEN）
-
類器官培養(yǎng)
-
緩沖器和解決方案
-
生物三凝膠基質
-
細胞因子分子
-
生物樣本庫
-
蛋白研究系列
-
修飾檢測試劑盒
