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基因組DNA的快速純化方法

發(fā)布時間： 2021-11-18　　點擊次數： 1995次

材料與儀器
尾部緩沖液蛋白酶 K
離心管玻璃棒
步驟
第 1 天

1. 大約 1.5 cm 長的尾部活檢樣品放在一個 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部緩沖液的小離心管中，加 35 ul 10 mg/ml 蛋白酶 K，在 55℃ 振搖溫育過夜。

尾部緩沖液（配 25 ml）

50 mmol/L Tris，pH 8                           1.25 ml 1 mol/L Tris，pH 8

100 mmol/L EDTA，pH8                        5 ml 0.5 mol/L EDTA，pH 8

100 mmol/L NaCI                                  0.5 ml 5 mol/L NaCI

1% SDS                                              1.25 ml 20% SDS

存放于室溫。

蛋白酶 K：10 mg/ml 水溶液，貯存于 -20℃。

第 2 天

2. 加 7 ul 10 mg/ml RNA 酶（不含 DNA 酶），在 37℃ 孵育 1~2 小時。

3. 在微量離心機中對樣品離心 20 分鐘以沉淀鼠毛。

4. 小心轉移 0.5 ml 上清，注意不要攪動沉淀。

5. 在管子中加 0.5 ml 異丙醇并通過翻轉輕輕地進行混合。應該立即有線狀沉淀形成。

不要劇烈混合。不要使 DNA 形成緊密團塊，否則會難以繞纏。

6. 在 Bunsen 燈的火焰上加熱封閉 100 ul 玻璃小吸管的末端。

7. 把末端封閉的小吸管浸到 DNA 溶液中并劇烈攪拌來纏繞 DNA。一直攪動吸管直到 DNA 緊緊地纏繞到上面。

8. 洗 DNA 是在三個順序排列的盛大約 50 ml 乙醇的燒杯中各浸 10 次（1 個是 70% 乙醇，另 2 個是 100% 乙醇）。洗 5~8 個樣品后換洗滌溶液。

9. 用一片膠帶標記玻棒末端，把它插在（DNA 端朝上）一塊橡皮泥，使風干 10~15 分鐘。

10. 用鉆石記號筆在黏附了 DNA 的那一末端刻線，弄斷玻棒，把帶 DNA 的那段放到已作標記的微量離心管中。

11. 加 0.5 ml TE ( pH 8 )。樣品在室溫下振蕩過夜。

第 3 天

12. 稍稍振蕩管子，用干凈鑷子拿掉玻璃棒（在不同樣品的操作之間燒一下鑷子）：繼續(xù)振搖 1~2 小時。（如果樣品只是用來進行 PCR 分析，玻棒可以留在管子里）。

13. 以 1:10 稀釋樣品，測 OD260 值以確定濃度（1 OD260=50 ug/ml).

14. DNA 貯存在 4℃。

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