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如何從擬南芥菜中分離葉綠體？
發(fā)布時(shí)間： 2021-11-17 點(diǎn)擊次數(shù)： 1560次材料與儀器
葉組織
研磨懸浮緩沖液
燒杯 Polytron 勻漿器步驟
1. 組織勻漿
(1) 收集 10 g 葉組織，放進(jìn)一 400 ml 的燒杯中。
(2) 加入 200 ml 冰冷的研磨懸浮緩沖液。在 4℃ 的房間中，用 Polytron 勻漿器進(jìn)行 6~7 個(gè) 3 秒鐘脈沖勻漿葉組織。
研磨重懸緩沖液：
10 mmol/L EDTA
50 mmol/L HEPES-KOH，pH 8.0
0.33 mol/L 甘露醇
0.5 g/L BSA ( 無脂肪酸）
5 mmol/L 抗壞血酸鹽（用前添加）
(3) 用網(wǎng)層米拉布（Calbiochem) 過濾勻漿，濾液倒進(jìn) 4 個(gè) 50 ml 離心管中。
2. 勻漿在 8000 g（Sorvall HB-4 轉(zhuǎn)頭，7000 r/min）離心一分鐘。
3. 小心地傾去上清。加 1 ml 1x SH。用駝毛刷重新懸浮葉綠體，動作要輕。
4. 吸 2 ml 含 35% Pecoll 的 1x SH 到一個(gè) 15 ml 的離心管中作為緩沖層：其上覆蓋重懸浮的葉綠體。13000 g（Sorvall HB-4 轉(zhuǎn)頭，10000 r/min）離心 3 分鐘。
5. 棄去上清，沉淀用 15 ml 1x SH 洗兩次，再用適當(dāng)體積的 1x SH 重新懸浮。- 下一篇：如何從肝臟組織中制備細(xì)胞核？
- 上一篇：葉綠體分離的操作方法
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