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酵母和細(xì)菌蛋白質(zhì)的代謝放射標(biāo)記的方法
發(fā)布時(shí)間： 2021-11-08 點(diǎn)擊次數(shù)： 1661次材料與儀器細(xì)胞
基本培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)步驟1. 接種細(xì)胞于只含有必需氨基酸和輔因子的已知成分的基本培養(yǎng)基，于合適溫度中度振蕩培養(yǎng)過夜。
2. 用新鮮的基本培養(yǎng)基稀釋培養(yǎng)物，繼續(xù)溫育至 107 細(xì)胞/ml （酵母）或?qū)?shù)期中期（細(xì)菌）。
3. 5000 g 室溫離心 10 分鐘收集細(xì)胞，用無硫酸鹽基本培養(yǎng)基重懸至 107 細(xì)胞/ml（酵母）或 5X108 細(xì)胞/ml（細(xì)菌）。
4. 加 H235SO4 至終濃度 20 μCi/ml。于適宜溫度輕度振蕩培養(yǎng) 1 小時(shí)（酵母）或 20 分鐘（細(xì)菌）。
5. 5000 g 室溫離心 10 分鐘收集細(xì)胞，吸出培養(yǎng)基，倒入放射性廢料桶。
6. 用冰冷的基本培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，如第 5 步離心收集細(xì)胞。將上清倒入放射性廢料桶。用巴氏滴管吸去離心管壁殘存的上清。
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