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qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析基本步驟（二）
發(fā)布時(shí)間： 2021-10-15 點(diǎn)擊次數(shù)： 5752次閾值，我們在操作軟件時(shí)上下拉動的橫線，是決定Ct值的因素之一。
閾值是熒光信號相對于基線有顯著增強(qiáng)的點(diǎn)，大多數(shù)儀器會根據(jù)基線平均信號，自動計(jì)算熒光信號的閾值水平，并設(shè)置一個(gè)比平均值高10倍的閾值。
也就是說，當(dāng)基線被正確的設(shè)置了，閾值也能手動調(diào)整成正確值。
需要注意的是：
1、讀取閾值相關(guān)的分析數(shù)據(jù)時(shí)，不能隨意改變閾值的設(shè)置。只有分析不同樣本，或相同樣本不同靶基因時(shí)，才能調(diào)整閾值。
2、設(shè)置閾值線時(shí)，要在擴(kuò)增曲線的指數(shù)擴(kuò)增區(qū)域內(nèi)設(shè)置，不能在起始階段，也不能在熒光背景（基線）區(qū)域。
3、每次改變閾值時(shí)，要查看標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率和R的平方有沒有改善。沒有使用標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，也可以計(jì)算3個(gè)復(fù)孔（相同條件擴(kuò)增的樣本）的標(biāo)準(zhǔn)偏差。好的閾值應(yīng)該要改善Ct值的表現(xiàn)。
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