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qPCR中的絕對定量是什么？
發(fā)布時(shí)間： 2021-10-14 點(diǎn)擊次數(shù)： 4988次絕對定量目的是使用PCR測定目的基因在樣本中的數(shù)量，即拷貝數(shù)。
在絕對定量中，想要得到目的基因的拷貝數(shù)，需要制作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖需要將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至不同濃度，作為模板進(jìn)行PCR。標(biāo)準(zhǔn)品是已知濃度的模板。
結(jié)束PCR后，以測得的CT值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
對待測樣品的目的基因進(jìn)行檢測時(shí)，只需要將得到的CT值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，即可計(jì)算出樣品中目的基因的拷貝數(shù)。
需要注意的是：
1、標(biāo)準(zhǔn)品必須來源可靠、濃度已知
2、標(biāo)準(zhǔn)品要和待測樣品要同時(shí)在儀器中擴(kuò)增
3、只能根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品覆蓋的濃度范圍，進(jìn)行樣品濃度的推測
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