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WB過程中最重要的環(huán)節(jié)——轉(zhuǎn)膜
發(fā)布時間： 2021-09-14 點擊次數(shù)： 12538次① 跑到溴酚藍距離最下緣 25px 時配電轉(zhuǎn)液（tris3.03g，甘氨酸 14.4g，甲醇 100ml，定容至 1L）
② 在電轉(zhuǎn)液中剝膠，裁膠，剪膜，膜活化（甲醇 1min，去離子水 1min，電解液 15min）
③ “三明治"黑板~海綿~三層濾紙~膠~膜（正面朝下，分清左右，與膠對應）~3 層濾紙~海綿 ~白板，夾緊后放入電轉(zhuǎn)槽中。（海綿，濾紙，膜需浸潤透，過程中不能干，趕趕氣泡）
④ 連接電源，一定要注意紅對紅，黑對黑，定電流和時間（150mA，1h，若分子量大于 90， 再加 200mA，2h）具體情況具體分析
經(jīng)驗總結(jié)：
溴酚藍跑到最終的距離是根據(jù)你所需要切的分子量決定的，假如你就只需要切一條 ACTIN(43Kda)這樣的，你*只需要跑到下膠，看到差不多 marker 分開了就可以切膠了。假如你要從最上到最下切好多條出來，你則需要把溴酚藍盡量跑到最下面，這樣 marker 容易被跑開，有利于切膠。濾紙和 PVDF 膜的裁剪必須要整齊，干凈，標記清晰。 PVDF 膜型號的選擇要正確。如正常的 30~170kDa 的分子一般需要孔徑 0.45mm 的膜就足夠了。太小的則需要選擇孔徑為 0.22mm 的膜。關(guān)于轉(zhuǎn)膜是否要加 SDS 的問題。SDS 帶負電，加 SDS 一般是針對那些分子量大的 WB，加入 SDS 可以增加分子導電性，這樣更利于轉(zhuǎn)膜。 關(guān)于轉(zhuǎn)膜電流，分子是否能夠轉(zhuǎn)過去和轉(zhuǎn)膜時間沒有必要關(guān)系，而更在于轉(zhuǎn)膜電流的大小。 舉個例子，200kDa 的分子量，你用 90mAh 就算轉(zhuǎn)一年都轉(zhuǎn)不過去。
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