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血清知識(shí)——熱滅活血清如何處理？有必要對(duì)血清進(jìn)行熱滅活嗎？
發(fā)布時(shí)間： 2021-08-18 點(diǎn)擊次數(shù)： 8033次
血清熱滅活
1. 為何會(huì)有熱滅活血清呢？ 加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。啟動(dòng)的補(bǔ)體系統(tǒng)參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，啟動(dòng)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化。在免疫學(xué)研究中，培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。
2. 血清熱滅活是否必要？ 血清熱滅活的步驟在1970年代就已建立，至今成為很多實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)血清前處理步驟；但許多先前認(rèn)為必須熱滅活的原因，卻早已經(jīng)不再成立：
●去除支原體污染?
早期血清加工使用的450nm濾膜，早已被100nm濾膜取代；且隨著加工技術(shù)的創(chuàng)新及嚴(yán)格的監(jiān)控，血清產(chǎn)品早已沒有支原體污染的疑慮。●去除補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì)?
胎牛血清中含有的補(bǔ)體僅為成年牛血清5-50％，而C3（補(bǔ)體中引起免疫反應(yīng)的主成分）在胎牛血清中則幾乎不能檢出，直接使用血清對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞株沒有負(fù)面影響。實(shí)驗(yàn)顯示，大多數(shù)的細(xì)胞不需要熱滅活血清，對(duì)于非必須的細(xì)胞來(lái)說(shuō)血清滅活對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)只有微小甚至無(wú)任何作用，還可能造成生長(zhǎng)速率降低，沉淀物還會(huì)顯著增多，不利于細(xì)胞觀察。因此，若非必須，不需要對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。
3. 血清熱滅活對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有幫助嗎？ 細(xì)胞生物學(xué)家比較了正常熱滅活胎牛血清對(duì)各種細(xì)胞株的生長(zhǎng)能力影響，發(fā)現(xiàn)11株細(xì)胞中，熱滅活對(duì)6 株細(xì)胞有負(fù)面影響（紅）、3株無(wú)影響（綠）、2株有微弱正面改善（黃）。
▲ 使用未滅活或滅活血清的細(xì)胞生長(zhǎng)狀況
所以，在正常操作下，熱滅活通常對(duì)“細(xì)胞生長(zhǎng)"沒有明顯的促進(jìn)作用，反而會(huì)破壞血清內(nèi)生長(zhǎng)因子，維生素，氨基酸等珍貴物質(zhì)，降低細(xì)胞增殖速度。
4. 血清熱滅活的缺點(diǎn)？ 若實(shí)驗(yàn)員設(shè)錯(cuò)水浴溫度或忘記按計(jì)時(shí)器，都會(huì)導(dǎo)致過(guò)高的加熱溫度（下圖）或過(guò)長(zhǎng)的加熱時(shí)間（下圖），進(jìn)而大大降低血清的功能，影響細(xì)胞生長(zhǎng)的表現(xiàn)。
缺點(diǎn)1：
▲ 過(guò)高的加熱溫度降低大多細(xì)胞株生長(zhǎng)速度（僅一株未受明顯影響）
缺點(diǎn)2：
▲ 過(guò)長(zhǎng)的加熱時(shí)間降低大多細(xì)胞株生長(zhǎng)速度（僅一株未受明顯影響）
滅活加熱過(guò)程會(huì)增加血清的沉淀狀況，而沉淀又常常被認(rèn)為是微生物的污染，進(jìn)而耗費(fèi)大量時(shí)間及精力驗(yàn)證是否污染，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)一再拖延。
5. 若細(xì)胞一定要使用熱滅活血清怎么辦？ 將需要進(jìn)行處理的血清置于56℃水浴30min，建議加放空白對(duì)照（同體積水）使用溫度計(jì)測(cè)溫，以測(cè)得溫度為56℃時(shí)為計(jì)時(shí)起始點(diǎn)，加熱中可不時(shí)輕度旋轉(zhuǎn)混勻血清。
在滅活過(guò)程中，除了需要嚴(yán)格監(jiān)測(cè)加熱溫度及認(rèn)真計(jì)算時(shí)間，還有幾個(gè)小技巧可以注意噢！
滅活時(shí)，水浴槽水面與血清液面等高！
使用水浴槽時(shí)，大多數(shù)人為避免血清瓶浮起來(lái)，會(huì)減少水浴槽內(nèi)的水量，讓水面降低；數(shù)據(jù)顯示，降低水面也會(huì)使瓶?jī)?nèi)加熱不均、拉長(zhǎng)加熱時(shí)間，增加血清破壞程度；所以還是建議將水浴槽內(nèi)水量增加，讓水面與血清液面等高，讓血清最大面積的接觸水流，提高滅活效率！
▲ 對(duì)比圖
至于血清瓶漂浮的問題，套上燒瓶用鉛環(huán)（下圖）就解決啦！
▲ 固定
滅活后，使用冷水浴降溫！
滅活后如果直接放在室溫或4度冰箱冷卻，僅靠空氣傳導(dǎo)散熱，冷卻效果差（下圖），使得實(shí)際降溫時(shí)間拉長(zhǎng)，對(duì)血清的影響較大；反之，流動(dòng)的冷水浴散熱速度較快，冷卻效果佳，縮短降溫時(shí)間的同時(shí)，也減少對(duì)血清的破壞。
▲ 對(duì)比圖
現(xiàn)代血清加工技術(shù)進(jìn)步，熱滅活已成為非必要步驟。熱滅活對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒有明顯促進(jìn)作用，反而會(huì)破壞血清、增加沉淀狀況。除非文獻(xiàn)指出該細(xì)胞必須使用滅活血清，一般細(xì)胞培養(yǎng)可省略血清熱滅活步驟。
如果必須使用滅活血清，加熱時(shí)水浴槽水面高度盡量與血清液面等高；滅活后使用冷水浴取代冰箱降溫，能大輻度減少對(duì)血清的破壞。直接選擇購(gòu)買已滅活的血清產(chǎn)品，也是個(gè)好選擇噢！
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